一、数据的准备1 .参考基因序列（NCBI下载的Genbank文件）
2.待分析的序列（新冠病毒基因组数据）
3.存储毒株相关信息的Excel文件数据下载地址：
二、创建新的数据库点击数据库创建图标创建一个新的数据库，并对其命名。
三、创建序列实验类型创建数据库后进入到数据库主界面，点击实验类型创建图标选择序列类型创建一个序列类型实验对序列类型实验进行命名点击完成后即创建好序列类型实验同样的，按照上述方法根据C DS的名称依次创建序列类型实验
四、导入参考基因序列点击数据库主界面左上角“文件”，选择“导入”弹出的窗口中选择“序列类型数据”中的“从文本文件中导入E MBL / G enbank序列”点击“浏览”选择参考基因序列文件依次点击“下一步”在导入模板窗口创建新的导入模板，注意此处实验类型应选择最初创建的序列实验genome在导入规则窗口中选中源类型为“文件”一栏，然后点击编辑目标，和Key进行关联，再点击“是”，然后依次点击“下一步”、“完成”后对导入模板进行命名。
最后选择创建的导入模板依次点击“下一步”、“完成”后，参考序列即导入Bionumerics中
五、从参考序列中提取C DS序列导入参考序列后，在数据库主界面的1号实验类型可以看到绿点，点击绿点则进入序列查看窗口点击下方的C DS栏会选中C DS序列，右侧会显示对应C DS的名称然后点击序列查看窗口左上角的“文件”，点击“保存选择”，在弹出的窗口中根据C DS的名称选择对应的实验。
按照上述方式，依次对其他C DS序列提取到相应的实验类型中
六、导入待分析的序列和参考序列的导入类似，只是在导入时选择“序列类型数据”中的“从文本文件导入F ASTA序列”。
此处支持序列文件的批量导入，后续的步骤和参考序列相同，都是创建新的导入模板，再按照模板导入序列文件。注意，此处的序列类型仍是选择“genome”
七、安装序列提取插件并设置在数据库主界面点击左上角的“文件”，选择“安装/删除插件”，在弹出的窗口中的实用工具菜单选择“sequence extraction”插件并点击“Activate”进行激活按照下图方式进入序列提取设置窗口以“O RF1 ab”为例，点击“添加”，按照下图进行选择点击“下一步”后，点击“选择”，勾选参考序列条目后点击“是”按照图中参数进行设置，点击“下一步”后，即设置完成，然后依次设置其他实验类型
八、提取样品序列的C DS序列在数据库主界面下，勾选所有样品序列，点击“分析”菜单，按照如图步骤进行分析等待分析一段时间即可在其他序列实验看到提取的数据
九、导入毒株信息按照下图类似的Excel模板导入，C DS字段必需外，可扩展其他字段点击数据导入图标，选择“条目信息数据”下的“导入字段（Excel文件）”，在导入模板界面，将key和key进行关联后，通过S hift键对其他字段进行全选，再点击“编辑目标”与“条目信息字段”进行关联点击“是”后会弹出提示窗口，点击“是”即可对导入模板命名后依次点击“下一步”、“完成”即可导入毒株信息
十、在比对窗口进行序列比对数据库主界面勾选所有样品序列后，点击右下方的比对，点击创建比对，此时弹出命名的窗口命名完后在弹出的窗口中选择C DS的序列实验，并点击“是”比对窗口内可以通过如图方式切换不同实验的序列比对选择实验名称后按照下图方式进行多重序列比对按照默认参数设置等待一段时间即出现序列的聚类图，根据结果按照M LST命名手动对相应的C DS进行编号当同一编号的条目多时，可以勾选这些条目后回到数据库主界面，鼠标右键C DS名称的字段，批量进行命名，依次对所有序列实验比对并命名后即得到MLST结果
十一、导出M LST结果并导入Bionumerics分析在数据库主界面按下图方式把结果保存至文件此时会生成Excel表格，将结果按照如下模板整理并另存为Excel文件导入M LST结果前需要创建字符类型实验，依次按照默认设置创建即可点击数据导入图标，选择“特征字符数据”下的“导入字段和字符（Excel文件）”导入模板界面首先将Key和key进行关联，而各C DS结果是与特征值“M LST”关联。
点击“是”后会弹出如下窗口，点击“是”即可和其他数据导入类似，后续按照默认设置即可导入M LST结果
十二、M LST最小生成树构建数据库主界面下勾选待分析的条目，创建对比对比窗口点击M LST实验类型前的图标，并点击显示值图标即可看到M LST结果此时鼠标右键字段中的采样地点进行分组按照默认设置创建组后，条目即会以不同颜色进行分组此时选择高级聚类分析弹出的窗口中对聚类进行命名，并选择“分类数据的最小生成树”模板点击“下一步”即生成M LST结果的最小生成树（Minimum Spanning Tree，MST），点击图标将图自动缩放显示点击显示设置图标可以更改设置显示出条目的Key
图文资料
